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| 假单胞菌HS-D36偏苯三酚1， 2-双加氧酶克隆表达与催化特性研究 |
| 李景龙， 袁永泽， 李丹丹， 杨雪婷， 耿 辉， 熊 丽， 刘德立 |
| 华中师范大学 生命科学学院， 武汉 |
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| 李景龙， 袁永泽， 李丹丹， 杨雪婷， 耿 辉， 熊 丽， 刘德立 |
| 华中师范大学 生命科学学院， 武汉 |
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摘要 由pnpC编码的偏苯三酚1,2-双加氧酶(Hydroxyquinol 1,2-dioxygenase，PnpC)是微生物分解硝基芳香族类环境污染物的关键酶.本研究从对硝基苯酚(p-nitrophenol，PNP)降解菌HS-D38(Pseudomonas sp.)中克隆pnpC基因，利用E.coli BL21(DE3)高效表达重组PnpC，通过亲和色谱纯化并分析其催化特性.实验结果表明：HS-D36的pnpC开放阅读框长度为873 bp，编码290个氨基酸，酶蛋白相对分子量33 KD；20℃、异丙基硫代-β-半乳糖苷(Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside，IPTG)诱导可高效表达重组PnpC；重组酶经Ni-NTA亲和色谱一步分离可达到电泳纯；纯酶比活力9.3 U/mg，纯化倍数37.2，活力收率23.8%；重组PnpC催化邻苯二酚开环反应的最适温度45℃、最适pH 5.0；Lineweaver-Burk双倒数作图表明PnpC对邻苯二酚降解的米氏常数(Km)为21.95 mol/L、最大反应速度(Vmax)为2.68 mol/(min·mg)；Fe3＋、Cu2＋、Fe2＋和Zn2＋对该酶具激活作用，Ni2＋则显示抑制效应.
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收稿日期: 2015-05-25
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| [1] |
张 桓 毓. 高考数学实战教学[J]. , 2016, 55(5): 0-0. |
| [2] |
王 志 斌. 抛物线焦点弦的性质[J]. , 2016, 55(5): 0-0. |
| [3] |
成 卫 东. 论高中数学直觉思维能力[J]. , 2016, 55(5): 0-0. |
| [4] |
李 春 平. 高中数学概念课教学[J]. , 2016, 55(5): 0-0. |
| [5] |
刘 勇. 如何提高高中数学学习效率[J]. , 2016, 55(5): 0-0. |
| [6] |
王 二 虎. 高中生数学思维障碍的成因及突破[J]. , 2016, 55(5): 0-0. |
| [7] |
王 俊 辉. 高中数学教学反思[J]. , 2016, 55(5): 0-0. |
| [8] |
廖 润 生. 中学数学教学思考[J]. , 2016, 55(5): 0-0. |
| [9] |
任 启 胜. 解析一次函数[J]. , 2016, 55(5): 0-0. |
| [10] |
廖 润 生. 常见数学题型教学策略[J]. , 2016, 55(5): 0-0. |
| [11] |
黄 梅 容. 如何培养小学生学习科学的兴趣[J]. , 2016, 55(5): 0-0. |
| [12] |
陈 永. 论小学生数学思维能力[J]. , 2016, 55(5): 0-0. |
| [13] |
黄 文 锋. 小学数学语言训练方法[J]. , 2016, 55(5): 0-0. |
| [14] |
李 芳. 如何培养小学低年级学生的数学语言表达能力[J]. , 2016, 55(5): 0-0. |
| [15] |
谭 玲 玲. 如何培养小学低段学生的数学学习习惯[J]. , 2016, 55(5): 0-0. |
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