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假单胞菌HS-D36偏苯三酚1, 2-双加氧酶克隆表达与催化特性研究 |
李景龙, 袁永泽, 李丹丹, 杨雪婷, 耿 辉, 熊 丽, 刘德立 |
华中师范大学 生命科学学院, 武汉 |
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李景龙, 袁永泽, 李丹丹, 杨雪婷, 耿 辉, 熊 丽, 刘德立 |
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摘要 由pnpC编码的偏苯三酚1,2-双加氧酶(Hydroxyquinol 1,2-dioxygenase,PnpC)是微生物分解硝基芳香族类环境污染物的关键酶.本研究从对硝基苯酚(p-nitrophenol,PNP)降解菌HS-D38(Pseudomonas sp.)中克隆pnpC基因,利用E.coli BL21(DE3)高效表达重组PnpC,通过亲和色谱纯化并分析其催化特性.实验结果表明:HS-D36的pnpC开放阅读框长度为873 bp,编码290个氨基酸,酶蛋白相对分子量33 KD;20℃、异丙基硫代-β-半乳糖苷(Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导可高效表达重组PnpC;重组酶经Ni-NTA亲和色谱一步分离可达到电泳纯;纯酶比活力9.3 U/mg,纯化倍数37.2,活力收率23.8%;重组PnpC催化邻苯二酚开环反应的最适温度45℃、最适pH 5.0;Lineweaver-Burk双倒数作图表明PnpC对邻苯二酚降解的米氏常数(Km)为21.95 mol/L、最大反应速度(Vmax)为2.68 mol/(min·mg);Fe3+、Cu2+、Fe2+和Zn2+对该酶具激活作用,Ni2+则显示抑制效应.
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收稿日期: 1900-01-01
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引用本文: |
李景龙,袁永泽,李丹丹,杨雪婷,耿辉,熊丽,刘德立. 假单胞菌HS-D36偏苯三酚1, 2-双加氧酶克隆表达与催化特性研究[J]. , 2015, 49(5): 0-.
李景龙, 袁永泽, 李丹丹, 杨雪婷, 耿 辉, 熊 丽, 刘德立. . , 2015, 49(5): 0-.
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链接本文: |
http://journal.ccnu.edu.cn/zk/CN/ 或 http://journal.ccnu.edu.cn/zk/CN/Y2015/V49/I5/0 |
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